1. 목적: 본 절차는 무균 수술 및 무균실 보호를 위한 표준화된 절차를 제공하는 것을 목표로 합니다.
2. 적용 범위: 생물학적 시험 연구소
3. 담당자: 품질관리 감독관/테스트 담당자
4. 정의: 없음
5. 안전 예방 조치
미생물 오염을 방지하기 위해 무균 작업을 엄격히 수행해야 하며, 작업자는 무균실에 들어가기 전에 자외선 램프를 꺼야 합니다.
6. 절차
6.1. 무균실은 무균 수술실과 완충실을 갖추어야 한다. 무균 수술실의 청정도는 10000등급에 도달해야 한다. 실내 온도는 20~24°C, 습도는 45~60%로 유지해야 한다. 클린벤치의 청정도는 100등급에 도달해야 한다.
6.2. 무균실은 청결하게 유지해야 하며, 오염을 방지하기 위해 쓰레기를 쌓아두는 것은 엄격히 금지됩니다.
6.3. 모든 멸균 장비 및 배양액의 오염을 엄격히 방지해야 합니다. 오염된 장비 및 배양액은 사용을 중단해야 합니다.
6.4. 무균실에는 5% 크레졸 용액, 70% 알코올, 0.1% 클로르메티오닌 용액 등과 같은 작업 농도의 소독제가 비치되어 있어야 합니다.
6.5. 무균실은 적절한 소독제를 사용하여 정기적으로 살균 및 청소하여 무균실의 청결도가 요구 사항을 충족하도록 해야 합니다.
6.6. 무균실로 반입해야 하는 모든 기구, 도구, 식기 및 기타 물품은 단단히 포장하고 적절한 방법으로 멸균해야 합니다.
6.7. 무균실에 들어가기 전에 직원은 비누 또는 소독제로 손을 씻고, 완충실에서 특수 작업복, 신발, 모자, 마스크 및 장갑으로 갈아입거나 (또는 70% 에탄올로 손을 다시 닦은 후) 무균실에 들어가야 합니다. 세균실에서 작업을 수행하십시오.
6.8. 무균실 사용 전, 무균실 내 자외선 램프를 30분 이상 가동하여 조사 및 살균하고, 동시에 클린벤치의 송풍 기능도 작동시켜야 합니다. 작업 완료 후에는 무균실을 즉시 청소하고 자외선 살균기로 20분간 추가 살균해야 합니다.
6.9. 검사 전, 오염 방지를 위해 시험 시료의 외부 포장은 훼손되지 않은 상태로 유지해야 하며, 개봉해서는 안 됩니다. 검사 전에 70% 알코올 솜으로 외부 표면을 소독하십시오.
6.10. 각 작업 중에는 무균 작업의 신뢰성을 확인하기 위해 음성 대조군을 실시해야 합니다.
6.11. 세균이 든 액체를 흡수할 때는 반드시 흡착볼을 사용하여 흡수해야 합니다. 빨대를 입에 직접 대지 마십시오.
6.12. 접종침은 사용 전후에 반드시 화염으로 멸균해야 합니다. 식힌 후 배양액을 접종할 수 있습니다.
6.13. 세균이 담긴 액체를 사용하는 빨대, 시험관, 페트리 접시 및 기타 기구는 5% 라이솔 용액이 담긴 살균통에 담가 소독하고 24시간 후에 꺼내어 헹궈야 합니다.
6.14. 세균성 액체가 테이블이나 바닥에 쏟아진 경우, 오염된 부위에 5% 페놀산 용액 또는 3% 라이솔을 즉시 부어 최소 30분 동안 그대로 둔 후 처리해야 합니다. 작업복과 모자가 세균성 액체에 오염된 경우, 즉시 벗어 고압 증기 살균 후 세척해야 합니다.
6.15. 살아있는 박테리아가 포함된 모든 물품은 수돗물에 헹구기 전에 소독해야 합니다. 하수구를 오염시키는 것은 엄격히 금지되어 있습니다.
6.16. 무균실의 콜로니 수는 매달 점검해야 한다. 클린벤치를 열고 내경 90mm의 멸균 페트리 접시 몇 개를 준비한 후, 녹여서 약 45°C로 식힌 영양 한천 배지 약 15ml를 무균적으로 주입한다. 배지가 굳으면 접시를 뒤집어 30~35°C 배양기에서 48시간 배양한다. 무균이 확인되면 접시 3~5개를 선택하여 작업 위치의 좌, 중, 우에 배치한다. 뚜껑을 열고 30분간 노출시킨 후, 접시를 뒤집어 30~35°C 배양기에서 48시간 배양한 후 꺼내어 검사한다. 100급 클린존에서는 접시당 평균 잡균 수가 1개 이하, 10000급 클린룸에서는 평균 3개 이하이어야 한다. 기준치를 초과할 경우, 반복적인 점검을 통해 기준치를 충족할 때까지 무균실을 철저히 소독해야 합니다.
7. "의약품 위생 검사 방법" 및 "중국 의약품 검사 표준 운영 절차"의 (멸균 검사 방법) 장을 참조하십시오.
8. 유통부: 품질관리부
클린룸 기술 지침:
무균 환경과 무균 재료를 확보한 후에는 특정 미생물을 연구하거나 그 기능을 활용하기 위해 무균 상태를 유지해야 합니다. 그렇지 않으면 외부의 다양한 미생물이 쉽게 혼입될 수 있습니다. 외부에서 유입된 무관한 미생물의 혼입 현상을 미생물학에서는 오염균이라고 합니다. 오염 방지는 미생물학 연구에서 매우 중요한 기술입니다. 무균 기술은 완전 멸균과 오염 방지라는 두 가지 측면을 포함합니다. 또한, 연구 대상 미생물, 특히 자연에 존재하지 않는 병원성 미생물이나 유전자 변형 미생물이 실험 용기에서 외부 환경으로 유출되지 않도록 해야 합니다. 이를 위해 미생물학에서는 다양한 예방 조치를 시행합니다.
무균실은 일반적으로 미생물학 실험실에 특별히 마련된 작은 방입니다. 합판과 유리로 만들 수 있으며, 면적은 4~5제곱미터 정도로 적당하고 높이는 약 2.5미터 정도가 좋습니다. 무균실 외부에는 완충실을 설치해야 합니다. 완충실과 무균실의 문은 서로 반대 방향을 향하도록 설치하여 공기 흐름으로 인한 이물질 유입을 방지해야 합니다. 무균실과 완충실 모두 밀폐되어야 하며, 실내 환기 장비에는 공기 여과 장치가 있어야 합니다. 무균실의 바닥과 벽은 매끄럽고 먼지가 잘 쌓이지 않으며 청소가 용이해야 합니다. 작업대는 평평해야 합니다. 무균실과 완충실에는 자외선 살균기가 설치되어 있어야 하며, 무균실의 자외선 살균기는 작업대에서 1미터 이상 떨어져 있어야 합니다. 무균실에 출입하는 모든 직원은 멸균된 의복과 모자를 착용해야 합니다.
현재 무균실은 주로 미생물 연구 시설에 존재하며, 일반 실험실에서는 클린벤치를 사용합니다. 클린벤치의 주요 기능은 층류 공기 흐름 장치를 이용하여 작업 표면의 미생물을 포함한 각종 미세먼지를 제거하는 것입니다. 전기 장치를 통해 공기가 헤파 필터를 통과한 후 작업 표면으로 유입되도록 하여 작업 표면을 항상 무균 공기 흐름으로 유지합니다. 또한, 외부와 가까운 측면에는 고속 공기 커튼이 설치되어 외부의 세균이 있는 공기가 유입되는 것을 방지합니다.
열악한 환경에서는 클린벤치 대신 나무로 된 무균 상자를 사용할 수도 있습니다. 무균 상자는 구조가 간단하고 이동이 용이합니다. 상자 앞면에는 두 개의 구멍이 있으며, 사용하지 않을 때는 밀고 당기는 문으로 막을 수 있습니다. 작업 중에는 팔을 안으로 넣을 수 있습니다. 앞면 윗부분은 유리로 되어 있어 내부 작업을 용이하게 합니다. 상자 안에는 자외선 램프가 있으며, 측면의 작은 문을 통해 기구와 세균을 넣을 수 있습니다.
무균 작업 기술은 현재 미생물학 연구 및 응용 분야에서 중추적인 역할을 할 뿐만 아니라, 형질전환 기술, 단일클론 항체 기술 등 다양한 생명공학 분야에서도 널리 사용되고 있습니다.
게시 시간: 2024년 3월 6일